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阻斷劑你了解多少 淺談阻斷劑

發(fā)布時間:2022-05-18 09:58:40來源:

目前為止在試劑研發(fā)方面本人應用阻斷劑的經驗還是非常少的,因為技術支持反饋的情況很少,所以一直沒在意。但其實作為研發(fā)人員,我們自己心里清楚,如果不添加阻斷劑,對于一些“特殊人群”,出假陰或者假陽的概率是很大的,比如我自己,曾經接受過Avastin的鼠抗治療,所以不排除治療期間出現(xiàn)其他指標的HAMA假陽。
這幾年“異嗜性抗體”是非常火的一個詞,我看很多公司研發(fā)內部的企業(yè)培訓都會涉及它。我翻了翻國外的幾家資料(Meridian、Roche、Scantibodies...),雖然是廣告宣傳頁,但是都很細致地講述了異嗜性抗體的產生原理和消除辦法,大家有時間可以去詳細讀一下,我這里談一些自己的體會。
們一般用小鼠IgG單抗的偏多,所以異嗜性抗體的著重點一般都放在HAMA(Human anti mouse antibodys)。人身體里之所以出現(xiàn)HAMA,資料里介紹一般是天生或者是后天免疫獲得的,對于天生來源的,大部分是多價的,而對于后天獲得的一般是單/雙價的(By Roche)。
(一)我們下面來分析產生假陰或假陽的幾種情況(By Meridian):
(1雙抗夾心法/間接法:

我們從上圖中可以看出,對于HAMA樣本,有可能會引發(fā)陰性樣本的假陽問題,也有可能會引發(fā)弱陽性樣本的假陰問題。

(2)競爭法

對于競爭法,HAMA的存在會影響小分子與對應抗體的結合,從而會引發(fā)假陽的風險;

(3)捕獲法:

捕獲法一般檢測的是抗體,不管是檢測哪種類型的抗體,HAMA的存在會影響二抗與被檢測抗體的結合,從而會引發(fā)假陰性。

另外這里有一點需要注意的是,由于抗體檢測是分型檢測的,即使沒有HAMA的存在,如果采取的是包被抗原檢測某一指定類型的抗體,那么其他類型的抗體都會與被檢類型的抗體產生競爭,所以這時候除去其它類型的抗體就成為了檢測的關鍵。比如上圖中的例子,我們檢測的抗體類型是IgM,那么IgG就會與其競爭包被抗原,此時用羊抗人IgG就成為了試劑提升靈敏度的關鍵。

(二)阻斷劑的種類

阻斷劑按照其供應商的分類一般就是分為主動類被動類。被動類阻斷劑好理解,就是非特異性的鼠、兔、羊、牛等來源的Ig或抗血清。正是因為HAMA與試劑中所用的抗體產生反應,所以在反應體系中事先加入過量的動物Ig來中和HAMA,這樣就會消除影響。但是據(jù)說被動阻斷劑的用量很大,但效果有時候卻并不明顯,也就是性價比太低,所以人們又造出來了主動阻斷劑。主動阻斷劑我通過資料并沒看出是什么,但是我理解的就是被動阻斷劑帶了導航,主動去封閉掉樣本中不想要的抗體。對于抗原檢測,本身檢測的就不是抗體,所以你可以用抗人IgG、IgM等把它們都封閉掉,斷了這個風險,但是需要注意的是這個抗人Ig抗體絕對不能和鼠Ig有交叉。對于抗體檢測,上面提到了,檢測IgM就封閉掉IgG,這時候有個點,有時候憑借天然的IgG阻斷劑根本無法屏蔽掉HAMA,很大的原因在于主動阻斷劑的個頭不夠大,或者是結合位置不好。

見上圖,如果主動阻斷劑為IgG單體,而且針對的是人Ig-Fc的羧基末端,那么對Fab端的阻斷作用就微乎其微,這時候可以把IgG單體合成聚合物形式,這樣一來位阻就大了,作用會明顯增加;或者說阻斷劑的作用位點直接就是人Ig-Fab端的骨架區(qū),這樣即使是單體作用也很明顯;或者做成抗人Ig-Fab的聚合物,作用會更好??赡苓@就是羅氏阻斷劑的研發(fā)思路。

(三)阻斷劑的應用問題

這里呢,我不太注重化學發(fā)光平臺的應用,因為發(fā)光平臺涉及清洗步驟,只要把阻斷劑加在樣稀里就可解決一些問題,主要還是層析平臺。層析平臺一般是將阻斷劑加在樣稀或樣品墊,但是這里有一個問題,阻斷劑如果也是小鼠來源的,質控線又包被的羊抗鼠,這樣標記物的鼠抗就會與阻斷劑的鼠抗發(fā)生強烈的競爭,對于定性試劑還好,對于以T/C形式定量的試劑,這肯定是個災難,所以獨此時立C線系統(tǒng)的使用就顯得很必要。目前雞IgY和DNP應該是首選的系統(tǒng)。

另外阻斷劑目前種類比較多,不同的項目可能適用性也不同,這就需要大量的篩選工作。總之一點,量大不一定管用,合適最重要。

 

標簽: 阻斷劑

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