為什么融合后得不到陽性克隆?

　　可能的原因：

　　1.動物未免疫成功就進行了融合。

　　2.融合后得到的克隆較少，故得到陽性克隆的機率也較小。

　　3.篩選克隆方法不正確。例如有些小分子物質(zhì)不能直接包被到酶標板上，使用了不合適的二抗等諸多因素。

　　4.抗原成份與細胞培養(yǎng)條件中的物質(zhì)相同或類似，或者與篩選過程中有同抗原結(jié)構(gòu)相同或類似的物質(zhì)產(chǎn)生了競爭反應(yīng)。例如，如果需要制備抗BSA 的單抗，則培養(yǎng)雜交瘤的培養(yǎng)基中能含有牛血清，否則牛血清中的BSA 直接與抗體相結(jié)合，最后做ELISA 篩選時無法得到陽性結(jié)果。解決的辦法只有使用其他動物的血清或者使用無血清培養(yǎng)基。制備酪蛋白的單抗，做ELISA 篩選時，二抗的稀釋液不能使用脫脂奶粉。

　　5.其它所有能影響ELISA 等相關(guān)篩選手段的因素。