為什么免疫后沒有效價或免疫后效價低?
發(fā)布時間:2019-06-03 10:48:00來源:科捷生物
可以從這幾個方面一一考慮:
1.設(shè)計的抗原與被免疫的動物內(nèi)源蛋白有極高的同源性或者抗原是免疫原性極差的小分子物質(zhì)。對于前一種情況應該重新設(shè)計抗原,設(shè)計抗原時盡量選取目標蛋白特異性的序列,可以設(shè)計短肽然后與載體蛋白偶聯(lián)之后免疫;對于后一種情況,首先確認小分子物質(zhì)是否已經(jīng)正確和載體蛋白偶聯(lián),如果偶聯(lián)沒有問題,可以更換其它的載體蛋白,一般來說KLH 是所有載體中優(yōu)先考慮的蛋白
2.免疫的周期不正確。免疫周期過長或過短,各免疫步驟之間的間隔過長或過短都有可能影響免疫效果。
3.免疫佐劑不合適。TiterMax 等佐劑在免疫時,對于某些抗原可能效果不佳,弗低佐劑也不能保證完全有效,此時可以考慮更換佐劑嘗試。
4.免疫劑量不合理。過大的免疫劑量可能導致免疫耐受,過少的免疫劑量可能無法激活免疫應答。
5.免疫途徑不合理。對于有些免疫原性弱的抗原,可以考慮脾內(nèi)免疫方法。
6.測效價的過程存在錯誤操作,尤其考慮包被是否成功或二抗使用是否正確。同時,一抗(即血清)稀釋梯度盡量放寬,一般建議從1:200或1:1000開始作梯度稀釋。對于小分子物質(zhì),效價達到1:2000仍可視為免疫功。