目前，用細(xì)胞工程制備人單抗在技術(shù)上和倫理上都存在一些難題，治療性抗體的開發(fā)就集中在具有治療前景的鼠源單抗上。但是鼠源單抗對(duì)人體具有異源性反應(yīng)，可誘發(fā)人抗鼠抗體效應(yīng)(Human anti-mouse antibodies, HAMA反應(yīng))，使得單抗的治療效果明顯滯后。隨著基因重組技術(shù)的發(fā)展和人們對(duì)抗體結(jié)構(gòu)認(rèn)識(shí)的深入，研究者們嘗試對(duì)鼠源性抗體進(jìn)行改造，致力于在保留與抗原結(jié)合的高親和力的基礎(chǔ)上，減少異源性抗體的免疫原性，推動(dòng)抗體人源化研發(fā)的進(jìn)程。

　　人源化抗體主要指以用基因克隆及DNA重組技術(shù)對(duì)鼠源單克隆抗體改造，重新表達(dá)產(chǎn)生的抗體。其大部分氨基酸序列被人源序列取代，基本保留親本鼠單克隆抗體的親和力和特異性，又降低了其異源性，有利應(yīng)用于人體。

　　嵌合抗體和CDR移植抗體

　　根據(jù)人源化程度不同，單抗又可分為嵌合抗體(60%-70%人源化氨基酸序列)和CDR(complementarity-determining region)移植抗體(90%-95%人源化氨基酸序列)。

　　1、人-鼠嵌合抗體

　　人-鼠嵌合抗體(chimeric antibody)：第一代人源化抗體。其是在基因水平上將鼠源單克隆抗體的V區(qū)和人抗體的C區(qū)(variable region, 可變區(qū))連接，在合適的宿主細(xì)胞內(nèi)表達(dá)可得到人-鼠嵌合抗體。嵌合抗體用于人體所產(chǎn)生的HAMA反應(yīng)比鼠源單抗明顯減弱;另外，人源C區(qū)(constant region，恒定區(qū))可更有效地介導(dǎo)人體一些免疫反應(yīng)，如CDC(complement-dependent cytotoxicity, CDC, 依賴補(bǔ)體的細(xì)胞毒性作用)，ADCC(antibody dependent cell mediated cytotoxicity, 抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用)。

　　2、CDR移植抗體

　　嵌合抗體雖然可以部分解決異種蛋白的排斥問題，但由于其還含有鼠源V區(qū)，依然有可能會(huì)誘發(fā)HAMA反應(yīng)，干擾抗體療效，誘發(fā)超敏反應(yīng)，在臨床上其應(yīng)用會(huì)受到一定限制。因此人們進(jìn)一步研究鼠源可變區(qū)的改造，研發(fā)出了CDR移植的人源化抗體，即第二代人源化抗體也是現(xiàn)在普遍所說(shuō)的人源化抗體(humanized antibody)。

　　CDR移植抗體是研究者們?cè)谇逗峡贵w的基礎(chǔ)上進(jìn)一步用人源框架區(qū)(Framework region, FR)替代鼠源框架區(qū)(FR)，僅保留了3個(gè)鼠源性CDR，其他全部為人源結(jié)構(gòu)，人源性可達(dá)90%以上。但對(duì)于特定的抗原分子，F(xiàn)R并不能隨意替換。多方面研究均證實(shí)，具有支持作用的FR不僅為CDR的構(gòu)象提供了環(huán)境，有時(shí)還參與抗體結(jié)合。因此簡(jiǎn)單的CDR移植往往明顯降低抗原-抗體結(jié)合的親和力，甚至是喪失抗原抗體結(jié)合的能力。針對(duì)這種狀況，目前主要有四種策略：1，同源替換，使用與鼠源對(duì)應(yīng)部分具有較大同源性的FR進(jìn)行替換;2，表面重塑，對(duì)鼠源CDR和FR表面氨基酸殘基進(jìn)行重塑，以使其類似于人抗體CDR的輪廓或者FR型式;3，補(bǔ)償變化，改編關(guān)鍵位置氨基酸殘基，以補(bǔ)償完全的CDR移植;4，定位保守，人源化單抗以FR保守序列為模板進(jìn)行人源化，但保留鼠源單抗可變區(qū)的關(guān)鍵氨基酸殘基。

　　3、全人源抗體

　　為了徹底消除異源性抗體的不良影響，90年代以后，人們將噬菌體展示技術(shù)應(yīng)用到抗體的表達(dá)和克隆上，產(chǎn)生了噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)。由此，抗體工程技術(shù)進(jìn)入到了一個(gè)新的發(fā)展階段，全人源化抗體的生產(chǎn)和應(yīng)用也逐漸走向成熟。

　　全人源化抗體是指將人類抗體基因通過轉(zhuǎn)基因或轉(zhuǎn)染色體技術(shù)，將人類編碼抗體的基因全部轉(zhuǎn)移至基因工程改造的抗體基因缺失動(dòng)物中，使動(dòng)物表達(dá)人類抗體，達(dá)到抗體全人源化的目的。目前已建立多種方法生產(chǎn)完全人源性抗體，主要有噬菌體展示技術(shù)、轉(zhuǎn)基因小鼠技術(shù)、核糖體展示技術(shù)和RNA-多肽技術(shù)。

　　人源化抗體的應(yīng)用

　　目前，人源化抗體在腫瘤，器官移植排斥反應(yīng)，病毒感染，血液性疾病，自身免疫性疾病等方面的治療和臨床診斷中顯示出越來(lái)越大的應(yīng)用前景。

　　1、在腫瘤治療中的應(yīng)用

　　近年來(lái)，興起的分子靶向治療，是根本意義上的腫瘤特異性治療手段，是以腫瘤抗原特異性結(jié)合的單抗為載體，連接放射性核素，化療藥物等對(duì)腫瘤有殺傷作用的負(fù)載而成的抗體導(dǎo)向療法。其靶向性好，毒性小等特點(diǎn)，非常適合腫瘤的內(nèi)放射治療。采用該技術(shù)用于臨床的人源性抗體有治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌的赫賽汀，用于治療結(jié)直腸癌的西妥昔單抗等。

　　2、自身免疫性疾病治療

　　自身免疫疾病多于自身抗體異常增多有關(guān)。很多臨床研究發(fā)現(xiàn)，一些具有免疫疾病的病毒感染患者，體內(nèi)病毒水平常伴隨某些免疫分子水平的升高而升高，因此很多免疫分子的人源化抗體在此類病毒的治療中顯示出很好的效果。

　　3、病毒感染中的應(yīng)用

　　病毒感染幾乎無(wú)特效藥，現(xiàn)有的核苷酸類抗病毒藥物效果并不理想，且毒副作用大，單抗治療因其針對(duì)性強(qiáng)，和相對(duì)比較安全，已越來(lái)越多研究者將其應(yīng)用于抗病毒的治療中。1998年，MedImmune公司用于治療呼吸道合胞病毒感染的帕利珠單抗獲得FDA批準(zhǔn)，成為第一個(gè)用于防止病毒感染的單克隆抗體。

　　展望

　　人源化和全人源化抗體的出現(xiàn)，為治療性抗體的廣泛應(yīng)用帶來(lái)了新的希望。但是人源化抗體是否可以完全解決鼠抗體臨床應(yīng)用中的所在問題，還有待大量臨床試驗(yàn)的檢驗(yàn)。目前，抗體人源化方法還在不斷發(fā)展和完善，目標(biāo)是提高抗體親和力，降低抗體異源性，同時(shí)兼顧抗體的免疫學(xué)活化作用。相信隨著技術(shù)的發(fā)展，人源化抗體將會(huì)在相關(guān)疾病的臨床診斷和治療中發(fā)揮更巨大的作用。